正常皮膚メラノサイト
１．ご案内
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皮膚メラノサイトは表皮の最下層に存在し、 紫外線を吸収して皮膚を守るメラニン色素を産生します。本細胞は、 皮膚表皮組織より調製した正常メラノサイトであり、凍結状態で分譲しています。 細胞の性状としてドーパ反応によるチロシナーゼ活性の存在、 及びメラノサイト特異的細胞マーカーを確認しています（図2、図3参照）。 メラニン産生に関する研究、紫外線による炎症研究、化粧品の開発研究等に有用な研究資源です。 |
| 資源番号 | 提供者 | 細胞数/本 | 解凍直後の生存率(*1) | 本数 |
|---|---|---|---|---|
| HT47250950-M | 女性（幼児） | 7.6 x 105 | 90％ | 16本 |
| HT1700-M(*2) | 男性（幼児） | 8.5 x 105 | 96％ | 21本 |
| HT2356-M | 女性（幼児） | 8.3 x 105 | 61％ | 25本 |
| HT0723-M | 女性（幼児） | 2.1 x 106 | 91％ | 12本 |
| HT73641231-M | 男性（幼児） | 8.1 x 105 | 86％ | 18本 |
| HT78827813-M | 女性（幼児） | 9.0 x 105 | 88％ | 19本 |
(*1)バイアルを微温湯で解凍した直後にトリパンブルー染色し、計数した細胞数から求めた数値です。
解凍翌日の生存率・接着率はこの数値より低下いたします。メラノサイトは凍結融解に弱いため、
解凍翌日にはかなり多数の細胞が死滅します。
現在のロットの推奨培地は、MGM-4 + 0.1μM endothelin-3（Lonza）です。
(*2)TYRP-1免疫抗体染色の結果は陽性を示しますが、DOPA反応が認められる細胞の割合は極めて少なく、細胞ペレットは白色を示します。
- 日本人
- 多指症の形成外科手術で摘出された余剰皮膚組織
- HCV、梅毒の検査結果は陰性
- 遺伝子解析研究への利用は不可
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細胞分離処理（dispase II処理、表皮・真皮分離）
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表皮
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細胞分散（0.25% トリプシン / 0.02% EDTA 処理）
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表皮角化細胞と共にフラスコへの細胞播種
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初回継代時0.25% トリプシン / 0.02% EDTAによる差時剥離法によりメラノサイトを分離
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MGM-4 + endothelin-3にて培養。0.25% トリプシン / 0.02% EDTAで継代、Geneticin処理による線維芽細胞除去
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セルバンカー 1に懸濁
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プログラミングフリーザーにて緩慢凍結
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液体窒素タンクに保管
５．細胞の性状検査
- 使用機材
- 培養培地：MGM-4 BulletKit（Lonza, Code No.: CC-3249）
- 培養器質：付着細胞培養用プラスチックディッシュ/フラスコ/マルチウェルプレート、またはtype I collagenコートチャンバースライド（IWAKI Code No.: 4722-010; 免疫染色時）
- DOPA試薬： 0.1% 3-(3,4-dihydroxyphenyl)-L-alanine（和光純薬 Code No.: 047-30541） in PBS(-)
- 免疫染色抗体：TYRP1 マウス・モノクローナル抗体（Novus Biological社 Code No.:NBP2-32906, clone TA99; 1/200希釈）
- 解凍直後の全細胞数、生細胞数： トリパンブルー色素排除法
- 増殖確認（図１）
- DOPA反応陽性の確認（図２）
- 細胞マーカー（Tyrosinase-related protein 1（TYRP1, 別名Mel5)の発現確認（図３）
- 微生物汚染検査（細菌・真菌・マイコプラズマ）： 陰性を確認
| 【図１】解凍後の細胞増殖 | |
培養１日後 
| 培養５日後 
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【図２】DOPA反応 | |
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【図３】TYRP1免疫抗体染色 | |
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多指症由来皮膚組織からの細胞調製と研究資源化について、誌上報告を行っております。
合わせてご参照下さい （[JSTAGE] )。
Nozomi Sugihara, Motonobu Satoh, Takuo Kosaka, Aya Kasamatsu-onishi, Akifumi Matsuyama, Shin Enosawa, Makoto Hikosaka, Tsuyoshi Kaneko, Arihiro Kohara
Preparation of Multiple Cell Types as Research Resources from Surplus Tissues Derived from Surgery for Polydactyly.
AATEX 22(2), 155-166, 2017