正常皮膚線維芽細胞
１．ご案内
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皮膚線維芽細胞は、保湿、弾力性維持、細胞外基質の産生等の皮膚の基本的な機能を担う重要な細胞です。 本細胞は、正常皮膚組織（真皮）より調製した線維芽細胞であり、凍結状態で分譲しています。 細胞の性状としてコラーゲンTypeI、ヒアルロン酸等の産生及び刺激による産生促進を確認しています （図2、図3参照）。 皮膚の機能解析或いは再生医療研究の素材、化粧品開発等、幅広い研究に有用な研究資源です。 |
| 資源番号 | 提供者 | 細胞数/本 | 解凍直後の生存率(*1) | 本数(*2) | 遺伝子解析 |
|---|---|---|---|---|---|
| HT73641231-F-1 | 男性（幼児） | 4.6 x 105 | >90％ | 19本 | 不可 |
| HT82507322-F-1 | 女性（幼児） | 9.7 x 105 | >90％ | 27本 | 不可 |
| HT78827813-F-1 | 女性（幼児） | 3.6 x 105 | >90％ | 20本 | 不可 |
| HT47250950-F-1 | 女性（幼児） | 9.8 x 105 | >90％ | 24本 | 不可 |
| HT5139-F-1 | 男性（幼児） | 6.0 x 105 | >90％ | 19本 | 不可 |
| HT19234228-F | 女性（60才代） | 5.0 x 105 | >90％ | 4本 | 可 |
| HT2899-F-1 | 男性（幼児） | 7.3 x 105 | >90％ | 20本 | 不可 |
| HT8348-F-1 | 男性（幼児） | 8.1 x 105 | >90％ | 19本 | 不可 |
| HT1700-F-1 | 男性（幼児） | 8.7 x 105 | >90％ | 25本 | 不可 |
| HT2356-F | 女性（幼児） | 1.2 x 106 | >90％ | 43本 | 不可 |
| HT0723-F | 女性（幼児） | 1.1 x 106 | >90％ | 17本 | 不可 |
| HT0202-F | 女性（幼児） | 7.0 x 105 | >90％ | 7本 | 可 |
| HT5224-F | 男性（幼児） | 8.5 x 105 | >90％ | 17本 | 可 |
| HT6400-F | 男性（幼児） | 8.4 x 105 | >90％ | 11本 | 可 |
| HT2058-F | 女性（幼児） | 1.1 x 106 | >90％ | 23本 | 可 |
(*1)バイアルを微温湯で解凍した直後にトリパンブルー染色し、計数した細胞数から求めた数値です。解凍翌日の生存率・接着率はこの数値より低下いたします。
(*2)記載の本数以上をご利用の場合は、資源により追加調製が可能です。
- 日本人
- 多指症の形成外科手術或いは乳癌手術（HT19234228）で摘出された余剰皮膚組織
- HCV、梅毒の検査結果は陰性
- HBV、HIVの検査結果は陰性（HT19234228-F）
↓
細胞分離処理（dispase II消化、表皮・真皮分離）
↓
真皮（細切）
↓
細胞分離（コラゲナーゼ消化）
↓
フラスコへの細胞播種、サブコンフルエントまで培養
↓
0.25% トリプシン / 0.02% EDTAで継代、培養
↓
セルバンカー 1に懸濁
↓
プログラミングフリーザーにて緩慢凍結
↓
液体窒素タンクに保管
５．細胞の性状検査
- 使用機材
- 培養培地：FGM-2 BulletKit（Lonza, Code No.: CC-3132）
- 培養器質：48 well cell culture plates (Corning Costar, 3548)
- ELISAキット：Hyaluronic Acid ELISA Assay (Biotech Trading Partners, Cat No. BTP-96200)
- ELISAキット（Procollagen Type I C-peptide (PIP) EIA Kit, TaKaRa, MK101）
- StepOnePlus Real-Time PCR System (Applied Biosystems)
- TaqMan FAST Advanced PCR Master Mix (Applied Biosystems, No. 4444556)
- TaqMan Gene Expression Assay (Applied Biosystems, Collagen Type I ; No. Hs164099_m1, HAS2 ; No. Hs00193435_m1)
- 解凍直後の全細胞数、生細胞数： トリパンブルー色素排除法
- 継代後の増殖確認（図１）
- 蛍光免疫染色法による細胞マーカー検査：◆ Vimentin ＋ , ◆ CD90 ＋
- コラーゲンTypeIの産生およびアスコルビン酸添加培養による産生促進効果の確認（図2）：ELISA、リアルタイムRT-PCR (GAPDH相対比)
- ヒアルロン酸の産生およびIL-1β添加培養による産生促進効果の確認（図３）：ELISA、リアルタイムRT-PCR (GAPDH相対比)
- 微生物汚染検査（細菌・真菌・マイコプラズマ）： 陰性を確認
| 【図１】継代後の細胞増殖 | |
培養１日後 
| 培養３日後 
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【図２】 アスコルビン酸によるコラーゲンTypeI産生促進効果の確認例 | |
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【図３】 IL-1βによるヒアルロン酸産生促進効果の確認例 | |
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(*)産生量はロットにより差がございます。
多指症由来皮膚組織からの細胞調製と研究資源化について、誌上報告を行っております。
合わせてご参照下さい （[JSTAGE] )。
Nozomi Sugihara, Motonobu Satoh, Takuo Kosaka, Aya Kasamatsu-onishi, Akifumi Matsuyama, Shin Enosawa, Makoto Hikosaka, Tsuyoshi Kaneko, Arihiro Kohara
Preparation of Multiple Cell Types as Research Resources from Surplus Tissues Derived from Surgery for Polydactyly.
AATEX 22(2), 155-166, 2017